正就讀中學的少年邁爾斯（沙梅克·摩爾 Shameik Moore 配音）意外被一隻遭受放射性汙染的蜘蛛咬傷，隨後身體發生奇特的變化。偶然機緣，他目睹了蜘蛛俠（克裏斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪頭目金並（列維·施瑞博爾 Liev Schreiber 配音）的戰鬥。為了阻止金並利用時空對撞機擾亂宇宙，蜘蛛俠最終壯烈犧牲。可未過多久，來自平行宇宙的頹廢的彼德·帕克（傑克·約翰遜 Jake M. Johnson 配音）出現在邁爾斯麵前。為了阻止金並的陰謀，並幫助這個帕克返回自己的宇宙，他們闖入金並的老巢。在這一過程中，二人遭到章魚博士和徘徊者的狙擊。與此同時，來自其他宇宙的女蜘蛛俠、暗影蜘蛛俠、蜘豬俠、二次元蜘蛛妹相繼出現。
　　他們合力與惡勢力展開鬥爭……